产品货号：
ME0019
中文名称：
miRNA反转录试剂盒(加尾法)
英文名称：
DIOG miRNA PolyA RT Kit
产品规格：
20T|40T
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本试剂盒采用基因工程改造的Poly A聚合酶，可为miRNA高效添加Poly A尾，以便于后续的RT反应。逆转录引物为特别设计的含有Oligo d(T)的引物，高度亲和含有Poly A尾的miRNA，使RT反应能够高效进行。DIOG miRNA加尾法逆转录试剂盒的RT效率优于多家同类产品，特别地，与百奥莱博DIOG miRNA加尾染料法荧光定量PCR试剂盒(货号：ME0017)配套使用，可免费获得配套的qPCR下游引物和更加理想的实验结果。
- 基因工程优化的Poly A聚合酶，miRNA Poly A聚合高效快速；
- 特别设计的含Oligo d(T)的引物，能够与miRNA Poly A+高效结合，RT效率高于多家同类试剂；
- 同一RNA一次RT可获得多个miRNA的RT产物，后续可进行多个miRNA的检测，节省样本用量。
| 组分 | 20T | 40T |
| RNase-free ddH2O | 400μL | 800μL |
| DIOG Poly A(yellow) | 20μL | 40μL |
| 2×Poly A Buffer | 200μL | 400μL |
| DIOG RTase Mix (red) | 40μL | 80μL |
| 2×RT Buffer | 200μL | 400μL |
| 说明书 | 1份 | 1份 |
保存：-20℃，避免反复冻融，有效期1年。
1.用于RT反应的器具和水应进行RNase灭活处理，操作人员应佩戴口罩、手套等，以防RNase污染。
3.模板RNA使用量：总RNA可在10pg～2μg之间。
3.试剂配制过程建议在碎冰上进行，DIOG RTase Mix粘度较大，应缓慢吸取，Tip头不要插入液体太深，以免粘染太多酶液。
- RNA加A尾：
- 取RNase-free离心管，配制如下混合液。
成分 用量 RNase-free ddH2O 至20μL DIOG Poly A 1μL 2×Poly A Buffer 1 0μL RNA 10pg～2μg - 轻轻混匀，37℃ 30min，迅速置于冰上。
- 取RNase-free离心管，配制如下混合液。
- RT反应液配制：
上述反应液在使用前5000rpm离心5s。
用移液器轻轻吹打混匀。成分 用量 取上述反应液 8μL 2×RT Buffer 10μL DIOG RTase Mix 2μL RNA 10pg～2μg - RT反应：
温度 时间 25℃ 5min 50℃ 15min 85℃ 5min - 反应完毕后，5000rpm离心5s，尽快放于冰上，直接进行PCR反应。如暂时不用，请放置于-20℃以下温度，在半年内使用完毕，不要反复冻融。模板如具有复杂二级结构或高GC区域，可将反应温度提高至55℃。
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